ДЕТЕКЦИЯ БЕТА-ЛАКТАМАЗ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
Первухин С.А., Иванова Е.Ю., Стаценко И.А., Пальмаш А.В., Витковская И.В., Филичкина Е.А.
ФГБУ «Новосибирский НИИ травматологии и ортопедии им. Я.Л. Цивьяна» Минздрава России, Новосибирск, Россия
Цель:
Выявить наличие генов лекарственной устойчивости у грамотрицательных возбудителей госпитальной пневмонии.
Материалы и методы:
Выявление генов, кодирующих карбапенемазы, проводилось методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с помощью двухмодульного анализатора GeneXpert (Cepheid, США) и картриджей к нему, предназначенных для быстрой идентификации генов лекарственной устойчивости грамотрицательной флоры к бета-лактамным антибиотикам – blaKPC, blaNDM, blaVIM, blaIMP и blaOXA-48 (XpertCARBA-R). Изучению подлежали 38 образцов материала отделяемого из трахеобронхиального дерева от 22 больных с госпитальной пневмонией, госпитализированных в ОРИТ. В случаях тяжелого и длительного течения пневмонии проводились повторные исследования мокроты с помощью ПЦР. Отделяемое из трахеобронхиального дерева с помощью пробозаборника помещали во флакон с реагентом для обработки образца. После перемешивания в течение 10 секунд, используя одноразовую пипетку, переносили 1,7 мл реагента в картридж, который устанавливали в анализатор GeneXpert, где происходила автоматизированная очистка образца, выделение ДНК, амплификация нуклеиновых кислот, а также полученных продуктов реакций.
Результаты:
Исследование 38 образцов отделяемого из трахеобронхиального дерева с помощью анализатора GeneXpert выявило присутствие генов карбапенемаз, относящихся к группам VIM, NDM, OXA-48 в 20 (52,6%) случаях. В 5 случаях выявлен ген группы VIM, в 4 – ген группы OXA-48. Кроме того, в 5 случаях обнаружена комбинация генов карбапенемаз групп VIM и OXA-48, в 6 случаях – комбинация генов групп VIM, NDM и OXA-48. Сопоставление результатов генетического и бактериологического исследований во всех случаях положительных тестов на карбапенемазы выявило наличие грамотрицательной флоры: P. aeruginosa, A. baumannii, K. pneumoniae. В случаях комбинации карбапенемаз при бактериологическом исследовании выявлено сочетание штаммов K. pneumoniae – A. baumannii и K. pneumoniae – P. aeruginosa. Определение чувствительности данной грамотрицательной флоры в бактериологической лаборатории показало наличие устойчивости к карбапенемам в 100%.
Выводы:
Использование системы GeneXpert позволяет идентифицировать наличие генов карбапенемаз, причем в очень короткие сроки (1,5 ч.), что обеспечивает возможность проведения ранней целенаправленной антибактериальной терапии.