ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ДЕТЕРМИНАНТ УСТОЙЧИВОСТИ NEISSERIA GONORRHOEAE К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ МЕТОДОМ МИНИСЕКВЕНИРОВАНИЯ

Цель:

Определение генетических детерминант устойчивости к бета-лактамам, аминоциклитолам и макролидам методом минисеквенирования для прогнозирования резистентности штаммов N. gonorrhoeae и персонализации антимикробной терапии.

Материалы и методы:

Материалом для исследования явились клинические изоляты N. gonorrhoeae, полученные от пациентов с диагнозом «гонококковая инфекция» (МКБ-10; А-54). Выбор последовательностей праймеров и гибридизационных зондов для обнаружения детерминант антибиотикорезистентности осуществлен согласно информации портала BLAST (США), их синтез выполнен ООО «ДНК-Синтез» (Россия). Метод минисеквенирования предполагает использование двух взаимосвязанных мультиплексных реакций ПЦР с определением однонуклеотидных полиморфизмов при помощи генетического анализатора с капиллярным электрофорезом. Первый раунд амплификации проведен с использованием набора «QIAGEN Multiplex PCR kit» (Германия), а последующее минисеквенирование – с использованием набора «SNaPshot» на приборе ABI 3130 Genetic Analyser (Applied Biosystems, США).

Результаты:

Разработанный метод ориентирован на обнаружение различных мутаций N. gonorrhoeae, нарушающих взаимодействие кодируемых ими рРНК и белков с антимикробными препаратами. Основой метода стала идентификация однонуклеотидных полиморфизмов фланкирующих мутации в рибосомальных генах rrs (С1192Т), rrl (A2059G), белках rpsE (делеция кодона 27 с одновременной мутацией К28Е, замена Т24Р), pon A(L421P) и pen A (D345a), а также мутации в промоторе белка-регулятора системы эффлюкса mtrR (-35 delA, инсерция Т либо ТТ в поз.10).Оценка изменчивости обнаруживает хорошую сходимость результатов с показателями устойчивости к бета-лактамам и макролидам, определенными методом серийных разведений. Среди штаммов с умеренным показателем резистентности к аминоциклитолам однонуклеотидные мутации обнаруживаются в редких случаях, что дает основания для расширения спектра анализируемых детерминант антибиотикорезистентности.

Выводы:

Выявление методом минисеквенирования у возбудителей ИППП генетических детерминант лекарственной устойчивости может быть использовано для определения высокоустойчивых к бета-лактамам, аминоциклитолам и макролидам штаммов N. gonorrhoeae и необходимой в этих случаях коррекцией антимикробной терапии.